C докладами выступили:
1. аспирант Петухов А.В. "Поиск белковых партнеров убиквитин-лигазы COP1"
Убиквитин-зависимая деградация белков - процесс на регуляцию которого рационально и эффективно направлять усилия в целях терапии многих заболеваний, в том числе опухолевой природы.
Механизм деградации белка-онкосупрессора p53, несмотря на длительную историю изучения, все еще нуждается в выяснении детальных механизмов с целью направленной разработки противораковых препаратов.
Уровень E3-убиквитинигазы COP1 повышен во многих случаях рака молочной железы и яичников, а также других типах опухолей, по сравнению с здоровыми тканями. Известный синергический эффект белков COP1 и MDM2 на деградацию p53 явился ключевым направлением нашей работы.
Были определены предположительные участки взаимодействия MDM2 и COP1 с той и другой стороны белок-белкового взаимодействия. Дальнейшее изучение COP1-MDM2 взаимодействия позволит получить данные для разработки нового класса ингибиторов, нового класса противоопухолевых препаратов COP1-MDM2 взаимодействия.
2. аспирант Дакс А.А. "Поиск белковых партнеров убиквитин-лигазы Pirh2 в условиях генотоксического стресса"
Для обнаружения значимых участников ответа на генотоксический стресс, взаимодействующих с p53-специфической E3-убиквитинлигазой Pirh2, был проведен GST pull-down с последующим двумерным электрофорезом. После этого отдельные пятна были вырезаны и подготовлены для анализа с помощью MALDI-TOF масс-спектрометрии.
3. аспирант Шувалов О.Ю. "Взаимодействие Е3 убиквитин-лигазы Мdm2 с метил-трансферазой Set7/9 при генотоксическом стрессе"
Показано физическое взаимодействие Е3 убиквитин-лигазы Мdm2 с метил-трансферазой Set7/9. Для этого была создана серия векторных конструкций, несущих делеционные варианты GST-MDM2, которые далее были экспрессированы в бактериальной ситеме. Очищенные белки были связаны с ядерным экстрактом клеточных линий U2OS (р53+) и H1299(р53-). Связавшиеся белки разделены в ПААГ. Визуализацию проводили с использованием Вестерн-блотинга (антиSet7/9 антитела).
4. к.б.н. Ермаков А.С. "Использование вирусных векторов для создания генно-модифицированных клеток и нокдауна p53 и set7/9"
В ходе проведения фармакологических скринингов нередко используются клеточные линии с «выключением» экспрессии того или иного гена. Использование лентививирусных конструкций со встроенным сиквенсом shRNA (small hairpin RNA) позволяет осуществить нок-даун работы интересующего гена, то есть нарушить синтеза кодируемого этим геном белка за счет блокирования и разрушения мРНК . Лентивирусная система на основе pLSL-puro-p53 (со встроенным сиквенсом shPNA для нок-дауна p53) позволила нам получить генно-модифицированные клоны клетокU2OS, нок-даунных по p53.
5. аспирант Петрова В.С. "Функциональный анализ ингибиторов Mdm2-p53 с помощью GST-pulldown взаимодействий in vitro"
Продолжается работа по исследованию перспективных ингибиторов Mdm2-p53 взаимодействия. Ин витро подтверждение влияния ингибиторов на взаимодействие белков р53 и Mdm2 планируется современным методом "pulldown". За текущий месяц были подобраны условия наработки и выделения белков для реализации этого эксперимента. Ближайшее время планируется отработка условий связывания белков.
6. к.б.н. Федорова О.А. "Изучение зависимости экспрессии белков семейства NR4A от транскрипционных факторов p53 и p63"
Продолжается работа по исследованию зависимости экспрессии генов NR4A от транскрипционных факторов p53 и p63. Было показано с помощью вестерн блот анализа зависимость экспрессии генов NR4A от p53 на уровне белка. С помощью риал-тайм ПЦР было доказано, что p53 влияет на экспрессию генов NR4A на уровне мРНК. Были отработаны условия хроматиновой имунопреципитации для дальнейших исследований связывания p53 с промотерными областями генов NR4A.
В качестве приглашенного докладчика выступил к.б.н. Ишов А.М. с лекцией "Механизмы резистентности к химиотерапии рака молочной железы".
