Семинар 24 апреля 2014 г.

24 апреля в научно-иследовательской лаборатории «Молекулярная фармакология» состоялся семинар, в которой приняли участие аспиранты и сотрудники лаборатории. На семинаре были выслушаны доклады о проделанной научной работе. 

C докладами выступили:

1аспирант Петухов А.В. "Поиск белковых партнеров убиквитин-лигазы COP1"

Убиквитин-зависимая деградация белков - процесс на регуляцию которого рационально и эффективно направлять усилия в целях терапии многих заболеваний, в том числе опухолевой природы.

Механизм деградации белка-онкосупрессора p53, несмотря на длительную историю изучения, все еще нуждается в выяснении детальных механизмов с целью направленной разработки противораковых препаратов.

Уровень E3-убиквитинигазы COP1 повышен во многих случаях рака молочной железы и яичников, а также других типах опухолей, по сравнению с здоровыми тканями. Известный синергический эффект белков COP1 и MDM2 на деградацию p53 явился ключевым направлением нашей работы.

Были определены предположительные участки взаимодействия MDM2 и COP1 с той и другой стороны белок-белкового взаимодействия. Дальнейшее изучение COP1-MDM2 взаимодействия позволит получить данные для разработки нового класса ингибиторов, нового класса противоопухолевых препаратов COP1-MDM2 взаимодействия.

2. аспирант Дакс А.А. "Поиск белковых партнеров убиквитин-лигазы Pirh2 в условиях генотоксического стресса"

Для обнаружения значимых участников ответа на генотоксический стресс, взаимодействующих с p53-специфической E3-убиквитинлигазой Pirh2, был проведен GST pull-down с последующим двумерным электрофорезом. После этого отдельные пятна были вырезаны и подготовлены для анализа с помощью MALDI-TOF масс-спектрометрии.

3. аспирант Шувалов О.Ю. "Взаимодействие Е3 убиквитин-лигазы Мdm2 с метил-трансферазой Set7/9 при генотоксическом стрессе"

Показано физическое взаимодействие Е3 убиквитин-лигазы Мdm2 с метил-трансферазой Set7/9. Для этого была создана серия векторных конструкций, несущих делеционные варианты GST-MDM2, которые далее были экспрессированы в бактериальной ситеме. Очищенные белки были связаны с ядерным экстрактом клеточных линий U2OS (р53+) и H1299(р53-). Связавшиеся белки разделены в ПААГ. Визуализацию проводили с использованием Вестерн-блотинга (антиSet7/9 антитела).

4. к.б.н. Ермаков А.С.  "Использование вирусных векторов для создания генно-модифицированных клеток и нокдауна p53 и set7/9"

В ходе проведения фармакологических скринингов нередко используются клеточные линии с «выключением» экспрессии того или иного гена. Использование лентививирусных конструкций со встроенным сиквенсом  shRNA (small hairpin RNA) позволяет осуществить нок-даун работы интересующего гена, то есть нарушить синтеза кодируемого этим геном белка за счет блокирования и разрушения мРНК . Лентивирусная система на основе pLSL-puro-p53 (со встроенным сиквенсом shPNA  для нок-дауна p53) позволила нам получить генно-модифицированные клоны клетокU2OS, нок-даунных по p53.

5. аспирант Петрова В.С. "Функциональный анализ ингибиторов Mdm2-p53 с помощью GST-pulldown взаимодействий in vitro"

Продолжается работа по исследованию перспективных ингибиторов Mdm2-p53 взаимодействия. Ин витро подтверждение влияния ингибиторов на взаимодействие белков р53 и Mdm2  планируется современным методом "pulldown". За текущий месяц были подобраны условия наработки и выделения белков для реализации этого эксперимента. Ближайшее время планируется отработка условий связывания белков.

6. к.б.н. Федорова О.А. "Изучение зависимости экспрессии белков семейства NR4A от транскрипционных факторов p53 и p63"

Продолжается работа по исследованию зависимости экспрессии генов NR4A от транскрипционных факторов p53 и p63. Было показано с помощью вестерн блот анализа зависимость экспрессии генов NR4A от p53 на уровне белка. С помощью риал-тайм ПЦР было доказано, что p53 влияет на экспрессию генов NR4A на уровне мРНК. Были отработаны условия хроматиновой имунопреципитации для дальнейших исследований связывания p53 с промотерными областями генов NR4A. 

В качестве приглашенного докладчика выступил к.б.н. Ишов А.М. с лекцией "Механизмы резистентности к химиотерапии рака молочной железы".

imageimageimageimageimageimage
Оцените материал
(0 голосов)
Авторизуйтесь, чтобы получить возможность оставлять комментарии

ПОДПИШИТЕСЬ НА НОВОСТИ

Управление научных исследований СПбГТИ (ТУ)

Горячие новости

Приборное оснащение лаборатории

Rambler's Top100
//'+ 'Рейтинг@Mail.ru<\/a><\/p>');})(window,navigator,document);//]]>